Статья: ИММУНОФЕРМЕНТНАЯ ТЕСТ-СИСТЕМА ДЛЯ МЕЖОПЕРАЦИОННОГО КОНТРОЛЯ СПЕЦИФИЧНОСТИ РЕКОМБИНАНТНОГО КАПСИДНОГО БЕЛКА ЦИРКОВИРУСА СВИНЕЙ 2-ГО ТИПА (2025)

Читать онлайн

Цирковирусные инфекции свиней (ЦВИС), вызываемые преимущественно цирковирусом свиней 2-го типа (ЦВС-2), представляют собой одну из наиболее значимых проблем в мировом свиноводстве. Ключевым инструментом контроля и профилактики ЦВИС является вакцинация. Рекомбинантные аналоги капсидного белка (rCap) цирковируса свиней 2-го типа (ЦВС-2) являются ключевыми компонентами современных диагностических тест-систем и субъединичных вакцин. Стабильность его антигенной активности - критический параметр, определяющий эффективность и воспроизводимость функционального продукта. Целью настоящего исследования явилась разработка и апробация иммуноферментной тест-системы для межоперационного контроля специфической активности белка rCap. Для получения рекомбинантных аналогов капсидного белка ЦВС-2 использовали ранее сконструированные рекомбинантный штамм-продуцент E. coli BL21(DE3)pLysS-ORF2 (для прокариотического аналога) и стабильно экспрессирующую клеточную линию яичников китайского хомячка CHO-K1/PCV-ORF2 (для эукариотического аналога), очистку белков проводили по ранее разработанным протоколам. Для сенсибилизации твердой фазы (полистироловых планшетов) использовали хроматографически очищенный IgG, выделенный из пула сывороток серопозитивных к ЦВС-2 свиней; специфический пероксидазный конъюгат получали перйодатным методом. В результате исследований получен стабильный пероксидазный конъюгат с плотностью мечения 1,5:1. Разработанная тест-система позволила провести полуколичественный анализ рекомбинантного сырья, демонстрируя хорошую воспроизводимость (коэффициент вариации<7%). Установлено, что тест-система является универсальной и позволяет оценивать активность вариантов rCap, полученных как в прокариотических, так и в эукариотических системах экспрессии, корректно распознавая их антигенные детерминанты. Таким образом, внедрение метода полуколичественного ИФА в производственный цикл позволит стандартизировать процесс межоперационного контроля качества биомассы, полученной при помощи технологий рекомбинантных ДНК, и гарантировать стабильные антигенные характеристики вакцинных и диагностических препаратов.

Ключевые фразы: цирковирус свиней 2-го типа, капсидный белок, технологии рекомбинантных днк, гетерологичная экспрессия, иммуноферментный анализ, межоперационный контроль качества сырья
Автор (ы): КУЗНЕЦОВА ЮЛИЯ АЛЕКСАНДРОВНА (KUZNETSOVA Y. A.), Ахунова Алсу Рузалевна (Ahunova A. R.), Галеева Антонина Глебовна (Galeeva A. G.), Хаертынов Камил Саубанович (Haertynov K. S.), Ефимова Марина Анатольевна (Efimova M. A.)
Журнал: УЧЕНЫЕ ЗАПИСКИ КАЗАНСКОЙ АКАДЕМИИ ВЕТЕРИНАРНОЙ МЕДИЦИНЫ ИМ. Н. Э. БАУМАНА

Предпросмотр статьи

Идентификаторы и классификаторы

SCI
Ветеринария
УДК
577.2. Молекулярные основы жизни. Молекулярная биология
578. Вирусология
619. Сравнительная патология. Ветеринария
636. Общее животноводство. Разведение млекопитающих животных и птиц. Скотоводство. Домашние животные и их разведение
Для цитирования:
КУЗНЕЦОВА Ю. А., АХУНОВА А. Р., ГАЛЕЕВА А. Г., ХАЕРТЫНОВ К. С., ЕФИМОВА М. А. ИММУНОФЕРМЕНТНАЯ ТЕСТ-СИСТЕМА ДЛЯ МЕЖОПЕРАЦИОННОГО КОНТРОЛЯ СПЕЦИФИЧНОСТИ РЕКОМБИНАНТНОГО КАПСИДНОГО БЕЛКА ЦИРКОВИРУСА СВИНЕЙ 2-ГО ТИПА // УЧЕНЫЕ ЗАПИСКИ КАЗАНСКОЙ АКАДЕМИИ ВЕТЕРИНАРНОЙ МЕДИЦИНЫ ИМ. Н. Э. БАУМАНА. 2025. № 4, ТОМ 264
Текстовый фрагмент статьи