Статья: ИММУНОФЕРМЕНТНАЯ ТЕСТ-СИСТЕМА ДЛЯ МЕЖОПЕРАЦИОННОГО КОНТРОЛЯ СПЕЦИФИЧНОСТИ РЕКОМБИНАНТНОГО КАПСИДНОГО БЕЛКА ЦИРКОВИРУСА СВИНЕЙ 2-ГО ТИПА (2025)

Читать онлайн

Цирковирусные инфекции свиней (ЦВИС), вызываемые преимущественно цирковирусом свиней 2-го типа (ЦВС-2), представляют собой одну из наиболее значимых проблем в мировом свиноводстве. Ключевым инструментом контроля и профилактики ЦВИС является вакцинация. Рекомбинантные аналоги капсидного белка (rCap) цирковируса свиней 2-го типа (ЦВС-2) являются ключевыми компонентами современных диагностических тест-систем и субъединичных вакцин. Стабильность его антигенной активности - критический параметр, определяющий эффективность и воспроизводимость функционального продукта. Целью настоящего исследования явилась разработка и апробация иммуноферментной тест-системы для межоперационного контроля специфической активности белка rCap. Для получения рекомбинантных аналогов капсидного белка ЦВС-2 использовали ранее сконструированные рекомбинантный штамм-продуцент E. coli BL21(DE3)pLysS-ORF2 (для прокариотического аналога) и стабильно экспрессирующую клеточную линию яичников китайского хомячка CHO-K1/PCV-ORF2 (для эукариотического аналога), очистку белков проводили по ранее разработанным протоколам. Для сенсибилизации твердой фазы (полистироловых планшетов) использовали хроматографически очищенный IgG, выделенный из пула сывороток серопозитивных к ЦВС-2 свиней; специфический пероксидазный конъюгат получали перйодатным методом. В результате исследований получен стабильный пероксидазный конъюгат с плотностью мечения 1,5:1. Разработанная тест-система позволила провести полуколичественный анализ рекомбинантного сырья, демонстрируя хорошую воспроизводимость (коэффициент вариации<7%). Установлено, что тест-система является универсальной и позволяет оценивать активность вариантов rCap, полученных как в прокариотических, так и в эукариотических системах экспрессии, корректно распознавая их антигенные детерминанты. Таким образом, внедрение метода полуколичественного ИФА в производственный цикл позволит стандартизировать процесс межоперационного контроля качества биомассы, полученной при помощи технологий рекомбинантных ДНК, и гарантировать стабильные антигенные характеристики вакцинных и диагностических препаратов.

Ключевые фразы: цирковирус свиней 2-го типа, капсидный белок, технологии рекомбинантных днк, гетерологичная экспрессия, иммуноферментный анализ, межоперационный контроль качества сырья
Автор (ы): КУЗНЕЦОВА ЮЛИЯ АЛЕКСАНДРОВНА, Ахунова Алсу Рузалевна, Галеева Антонина Глебовна, Хаертынов Камил Саубанович, Ефимова Марина Анатольевна
Журнал: УЧЕНЫЕ ЗАПИСКИ КАЗАНСКОЙ АКАДЕМИИ ВЕТЕРИНАРНОЙ МЕДИЦИНЫ ИМ. Н. Э. БАУМАНА

Предпросмотр статьи

Идентификаторы и классификаторы

SCI
Ветеринария
УДК
577.2. Молекулярные основы жизни. Молекулярная биология
578. Вирусология
619. Сравнительная патология. Ветеринария
636. Общее животноводство. Разведение млекопитающих животных и птиц. Скотоводство. Домашние животные и их разведение
Для цитирования:
КУЗНЕЦОВА Ю. А., АХУНОВА А. Р., ГАЛЕЕВА А. Г., ХАЕРТЫНОВ К. С., ЕФИМОВА М. А. ИММУНОФЕРМЕНТНАЯ ТЕСТ-СИСТЕМА ДЛЯ МЕЖОПЕРАЦИОННОГО КОНТРОЛЯ СПЕЦИФИЧНОСТИ РЕКОМБИНАНТНОГО КАПСИДНОГО БЕЛКА ЦИРКОВИРУСА СВИНЕЙ 2-ГО ТИПА // УЧЕНЫЕ ЗАПИСКИ КАЗАНСКОЙ АКАДЕМИИ ВЕТЕРИНАРНОЙ МЕДИЦИНЫ ИМ. Н. Э. БАУМАНА. 2025. № 4, ТОМ 264
Текстовый фрагмент статьи