Архив статей журнала
Определение аминокислотного состава биологических жидкостей имеет важное диагностическое значение. К общепринятым методам анализа аминокислот относятся хроматографические, электрофоретические и масс-спектрометрические методы. Однако в исследовательских целях для решения частных задач зачастую возникает необходимость определения не полного аминокислотного профиля, а концентрации отдельных аминокислот. В настоящем обзоре представлен анализ литературных данных по методам определения индивидуальных аминокислот в биологических жидкостях. Показано, что определение аминокислот можно проводить спектрофотометрическими, электрохимическими методами, а также с использованием широкого набора биосенсоров, при этом предел обнаружения не уступает хроматографическим методам анализа.
DUSP9/MKP-4 принадлежит к семейству биспецифических протеинфосфатаз, негативно регулирующих MAP-киназы (ERK, p38 и JNK). Экспрессия DUSP9 значительно (20-80-кратно) снижена по сравнению c нормальной тканью в 95% исследованных образцов почечно-клеточной карциномы человека. Эти и другие научные данные указывают на то, что DUSP9 является привлекательной мишенью для использования в клинической практике. Однако до сих пор единственным источником клинического материала для исследования экспрессии DUSP9 служили постоперационные биопсийные образцы опухоли. Это значительно ограничивает возможности использования DUSP9 в клинических целях. Целью настоящей работы была оценка возможности обнаружения DUSP9 в моче человека. В работе использовали клетки карциномы почки человека ACHN, трансфицированные DUSP9-экспрессирующим вектором, и образцы мочи 3 здоровых добровольцев. DUSP9 белок детектировали, используя метод Вестерн-блота в лизатах осадков, полученных методом центрифугирования. Мы показали, что белок DUSP9 содержится в осадке фракции мочи, полученной при низкоскоростном центрифугировании (10000 g). Также он присутствует во фракции внеклеточных везикул, обогащенных экзосомами. Полученный результат свидетельствует о том, что анализ экспрессии DUSP9 возможен с помощью жидкостной биопсии. Это может существенно расширить применимость этого анализа в клинических целях.
Выявлена высокая цитотоксическая активность (Z)-(2-(2-Гидрокси-5-хлорфенил)-2-фенилэтенил)алкилдифенилфосфоний хлоридов на уровне препарата сравнения доксорубицина. Протестированные фосфониевые соли в большинстве случаев оказались менее токсичными в отношении условно-нормальных клеточных линий. На примере соединения РР8, содержащего октильный радикал при атоме фосфора, показана частичная остановка клеточного цикла в фазе G1, усиленная генерация активных форм кислорода, а также индукция митохондриального апоптоза опухолевых клеток M-HeLa. Экспериментальные данные подтверждаются повышенным уровнем белков р53, р21, H2A. X и каспазы-9, обнаруженным с помощью мультиплексного анализа, и свидетельствуют о возникновении двухцепочечных разрывов ДНК в результате воздействия исследованного соединения. Таким образом, дальнейшие структурные модификации с целью повышения селективности исследуемых соединений позволят рассматривать их в качестве платформы для создания новых эффективных химиотерапевтических агентов.
Целью исследования было изучение адъювантных свойств хитозана в сравнении с гидроксидом алюминия при иммунизации рекомбинантными белками Pseudomonas aeruginosa. В работе использовали рекомбинантный белок F наружной мембраны (OprF) и рекомбинантный анатоксин P. aeruginosa, к которым добавляли 0.5% препарат хитозана, растворенный в глутаминовой кислоте с pH 5.0 или гель гидроксида алюминия. Испытали соотношение гидроксида алюминия к белку 3:1 и 1:1, а хитозан добавляли в количестве 100 мкг и 50 мкг для одной иммунизирующей дозы. При иммунизации препараты вводили мышам внутрибрюшинно двукратно с двухнедельным интервалом, а затем через две недели животных заражали внутрибрюшинно P. aeruginosa (РА-103), подсчитывая погибших и выживших животных. Иммунизация рекомбинантным белком OprF в дозе 25 мкг и рекомбинантным анатоксином в дозе 50 мкг как с гидроксидом алюминия, так и с хитозаном, способствовала развитию равнозначных протективных свойств. При комплексном введении двух рекомбинантных белков было выявлено усиление защитных свойств с использованием обоих адъювантов. Исследовали возможность применения рекомбинантных антигенов без адъюванта и уменьшения их иммунизирующей дозы при бустерной иммунизации. Снижение иммунизирующей дозы в два раза при повторном введении не уменьшило протективный эффект, а в случае хитозана, приводило к усилению иммунного ответа при бустерной иммунизации рекомбинантными антигенами без адъюванта. Таким образом, для рекомбинантных белков P. aeruginosa выявлены адъювантные свойства хитозана, не уступающие по индукции протективных свойств гидроксиду алюминия.
Показано, что эффективность иммунного ответа в виде продукции специфичных антител против иммуногенных пептидных конструкций, составленных из консервативных фрагментов оболочечного белка Е2 вируса гепатита С, зависит от использованных в составе препаратов адъювантов и носителей. Наиболее эффективное образование специфичных антител отмечено в ответ на введение пептидных конструкций, содержащих В- и Т-эпитопы белка Е2, конъюгированных с носителем с адъювантными свойствами Иммуномаксом. Антитела, полученные в ответ на иммунизацию конъюгатами пептидных конструкций с Иммуномаксом, связывали оболочечный белок Е2 и гетеродимер оболочечных белков Е1Е2 вируса гепатита С.