Представлены данные о результатах сборки полных геномов двух клинических штаммов Klebsiella pneumoniae сиквенс-типа ST395, выделенных в 2021–2022 гг. в лечебных учреждениях Республики Беларусь.
Мембранный иммунохроматографический анализ (ИХА) с наночастицами золота в качестве репортеров сигнала является востребованным инструментом экспресс-диагностики ряда возбудителей инфекционных заболеваний, в т. ч. и холеры (Vibrio cholerae). Во ФБУН ГНЦ ПМБ разработан первый отечественный иммунохроматографический тест (ИХТ) для выявления патогенных вибрионов после обогащения образцов через культивирование в питательной среде.
Проводятся его испытания с целью последующей госрегистрации. Проведена апробация разработанного ИХТ – «Тест-полоска V. cholerae O1 Tox+» для прямого обнаружения холерных вибрионов в клинических образцах, собранных в Республике. Показана возможность прямого обнаружения антигена и токсина V. cholerae в образцах стула пациентов с диарейным синдромом с помощью ИХТ «Тест-полоска V. cholerae O1 Tox+». При исследовании 73 образцов стула в ИХА и полимеразной цепной реакции (ПЦР) чувствительность теста относительно ПЦР составила 100% по О1 антигену и 73% по ИХТ, специфичность – 100%.
Белок G широко используется в таких областях, как биохимия (изучение механизмов клеточного ответа на внешние стимулы, включая гормоны, нейромедиаторы и абиотические факторы), фармацевтика (разработка лекарств, модулирующих активность G-белков, для лечения сердечной недостаточности, воспалений и лейкоза), биотехнологии (выделение и очистка иммуноглобулинов из образцов, иммобилизация антител на поверхности). Наличие производства отечественного белка G актуально для развития в стране in vitro диагностики.
Патогены группы ESKAPE являются возбудителями многочисленных нозологий и одной из причин смерти от антибиотикорезистентных микроорганизмов. Наиболее тяжелое клиническое течение инфекций отмечается, когда возбудители находятся в ассоциациях и в организме присутствует сразу несколько патогенов. Микробные ассоциации могут основываться как на антагонизме, так и на синергизме, что, в свою очередь, может усиливать вирулентность участников тандема. Данный обзор посвящен изучению спектра популярных ассоциантов для ESKAPE-патогенов и их влиянию на вирулентность возбудителей внутри ассоциации.
С начала пандемии новой коронавирусной инфекции (COVID19), объявленной Всемирной организацией здравоохранения 11 марта 2020 г., прошло более пяти лет. За этот период накопился значительный массив знаний о динамике распространения вируса SARS-CoV-2 и о его эпидемиологических проявлениях. Определены источник возбудителя инфекции, механизм и пути заражения. В результате активных исследований разработаны вируснейтрализующие препараты. Вместе с тем на протяжении пандемии появились новые варианты вируса SARS-CoV-2, содержащие многочисленные мутации в субъединице S1 шиповидного белка, что привело к снижению эффективности многих одобренных вакцин и терапевтических средств на основе моноклональных антител. В связи с этим возникла острая потребность в идентификации новых мишеней для разработки вакцин и препаратов следующего поколения с широким спектром действия, способных эффективно противодействовать всем известным вариантам вируса SARS-CoV-2. В настоящем обзоре представлен анализ перспективных мишеней в субъединице S2 шиповидного белка SARS-CoV-2.
Обзорная статья посвящена одним из самых известных, хорошо изученных, но при этом остающихся одними из самых опасных для человека микроорганизмов - бактериям рода Staphylococcus. В статье рассмотрены современные сведения о таксономии, эволюции, морфологии, биохимии, генетике данного микроорганизма. Наибольшее внимание уделено развитию и прогрессированию устойчивости стафилококков к антимикробным средствам, в т. ч. в форме биопленок. Отмечено, что стафилококки обладают пластичной клеточной и генетической системой, позволяющей бактериям проявлять максимальное число адаптивных способностей к выживаемости и расширению своего влияния на инфекционную заболеваемость человека и животных. При этом показано, что исследование и обнаружение этих систем и молекулярно-генетических комплексов дают возможность формирования лекарственных и защитных средств от широкого круга стафилококковых инфекций. Ключевую роль в этих процессах играют такие системы, как система оперонов agr, двухкомпонентная система генов ArlRS, кластер генов ica, сигма-фактор sigB, кассетная хромосома стафилококка mec (SCC-mec), ферменты и токсины бактерий, их клеточная стенка. Эти системы рассматриваются исследователями в качестве мишеней терапевтического воздействия. В последние годы в связи с неэффективностью монотерапии антибиотиками стафилококковых инфекций сформировалась тенденция к поиску альтернативных препаратов на основе комбинаций антибиотиков, усиленных биофлавоноидами, алкалоидами, противоопухолевыми и противовирусными веществами, а также световым излучением.
В обзорной статье представлена информация о серологических методах диагностики бруцеллеза у людей, а также отражены недостатки и преимущества этих методов, составлен обзор препаратов для диагностики. Описана история появления и совершенствования классических методов и представлена информация о новых серологических методах диагностики бруцеллеза.
В статье рассматривается технологические подходы, применяемые к изготовлению и хранению основных иммунореактивных компонентов медицинского изделия «Тест-система дот-иммуноферментная для детекции туляремийного микроба моноклональная (ДИАТул-М)», которые обеспечили длительную стабильность готовых реагентов и сырьевых материалов. По результатам работы установлено, что высушивание моноклонального пероксидазного конъюгата с добавлением сахарозы обеспечивает сохранение его специфической активности до 10 лет при строгом соблюдении заданных условий хранения. Хранение моноклональных антител без существенной потери активности возможно в замороженном и высушенном виде с сахарозой в течение 5 лет.
Pseudomonas aeruginosa является одним из самых распространенных и прогностически сложных видов бактерий, выделяемых из респираторных образцов от пациентов с муковисцидозом (МВ). Синегнойная палочка представляет собой один из самых неуязвимых и резистентных к стандартным схемам терапии видов, особенно у пациентов на фоне длительной колонизации. Появление на российском рынке препаратов таргетной терапии стало большим прорывом в лечении МВ. Ввиду этого вопрос о возможности эрадикации P. aeruginosa из респираторного тракта пациентов с МВ на фоне терапии является актуальным для врачей различных специальностей. Проведено изучение биологических свойств 25 изолятов, выделенных из респираторных образцов 9 пациентов с МВ Самарской области, получающих патогенетическую терапию. У всех штаммов проведено изучение их культуральных свойств. Для всех штаммов проведено определение чувствительности к антибактериальным препаратам, бактериофагам, а также сняты белковые спектры методом экстракции с муравьиной кислотой, на основании которых построены CCI-матрицы для анализа степени родства между клонами и динамической оценки их протеомных характеристик. Серия наблюдений демонстрирует, что популяция штаммов характеризуется значительной гетерогенностью. Морфологически идентичные изоляты, полученные от пациентов в разные сроки наблюдения, сходны белковыми профилями и чувствительностью к бактериофагам. Однако уровень чувствительности к антибактериальным препаратам не коррелировал с протеомными и морфологическими характеристиками. Таким образом, проведение теста на определение чувствительности к бактериофагам может быть дополнительным критерием для оценки степени гетерогенности сформированного бактериального сообщества.
Представлены результаты изучения иммунологической активности in vivo субъединичного белка RibH1 Brucella abortus. Исследования показали, что однократное внутримышечное введение биомоделям 100 мкг субъединичного антигена RibH1 вызывает выраженную иммунологическую реакцию, которая проявляется активизацией лимфоцитопоэза с поляризацией в сторону пролиферации Т-клеток, активацией выработки цитокина интерлейкин-2, усилением метаболической активности (бактерицидного потенциала) фагоцитов. На ранних сроках после иммунизации RibH1 у экспериментальных животных отмечается формирование пула Т-лимфоцитов, реактивных в отношении исследуемого антигена бруцелл, что указывает на развитие адаптивных иммунологических реакций и может способствовать формированию активного Т-клеточного иммунитета против бруцеллезной инфекции. Таким образом, показана перспектива использования антигена RibH1 B. abortus в качестве компонента субъединичной вакцины против бруцеллеза.
Цель исследования – экспериментально обосновать возможность оптимизации стадии формоловой детоксикации безмикробного центрифугата штаммов Vibrio cholerae 569В и V. cholerae М-41 при производстве холерной химической вакцины. В качестве изменяемых факторов воздействия на процесс детоксикации были выбраны ее длительность и температура, при которой идет процесс. После окончания детоксикации проводили контроль специфической активности и специфической безопасности компонентов вакцины – холероген-анатоксина и О-антигенов. Показатели специфической активности (в реципрокных титрах) в дот-иммуноанализе составляли не менее 8 для холероген-анатоксина, 32 – для О-антигена Инаба, 160 – для О-антигена Огава, что соответствовало нормативной документации.
Исследование компонентов по показателю «Специфическая безопасность» выявило, что сокращение длительности детоксикации до 14 суток и увеличение температуры до 24 ± 2°C привело к неполной детоксикации безмикробного центрифугата штамма V. cholerae 569В.
Из полученных компонентов вакцины были выбраны наиболее активные и специфически безопасные образцы, из них была приготовлена экспериментальная таблеточная смесь, которая была проверена на соответствие промышленному регламенту на производство по показателям «Формальдегид», «Специфическая безопасность», «Аномальная токсичность», «Специфическая активность», «Иммуногенность». Результаты свидетельствуют о полном соответствии изученных свойств приготовленной смеси промышленному регламенту. Полученные данные свидетельствуют о возможности сокращения стадии детоксикации у штамма V. cholerae М-41 на 50% и V. cholerae 569В на 30% при повышении температуры до 37°C и 21°C соответственно.
Исследования, направленные на поиск перспективных для диагностики туляремии антигенных комплексов, совершенствование на их основе имеющихся и конструирование новых диагностических препаратов, не утрачивают своей актуальности. При этом большие надежды возлагаются на поверхностные структуры бактериальных клеток (липополисахарид, белки наружной мембраны) туляремийного микроба.
Целью нашего исследования явилось экспериментальное обоснование возможности применения комплексных антигенов внешних мембран и секретируемых стресс-белков туляремийного микроба для разработки тест-системы для определения специфических антител.
Результаты и обсуждение. Использование комплексных антигенов внешних мембран туляремийного микроба в иммуноферментном анализе (ИФА) позволяет выявлять специфические антитела у вакцинированных людей до 1,5 лет и лабораторных животных до 1,5 мес. после вакцинации (срок наблюдения). При этом в сыворотке вакцинированных людей обнаруживаются специфические антитела класса G и M. Применение комплексных антигенов в иммуноблоттинге может использоваться в качестве подтверждающего теста при скрининге сывороток в ИФА. Полученные стрессбелки обладают более низкой связывающей активностью в ИФА, но позволяют выявлять специфические антитела у вакцинированных лабораторных животных в более ранние сроки.
Заключение. В проведенной работе был изучен диагностический потенциал комплексных антигенов и секретируемых стресс-белков Francisella tularensis. Показана возможность использования комплексных антигенов внешних мембран туляремийного микроба для разработки экспериментальной тест-системы для детекции противотуляремийных антител. Секретируемые стресс-белки могут быть полезны при конструировании тест-систем для ранней диагностики туляремии.
- 1
- 2