Архив статей журнала
В статье представлены результаты сравнительного анализа различных способов выделения ДНК из замороженных листьев смородины чёрной для оценки генетического разнообразия сортов с помощью SSR-маркеров. В задачи исследования входило подобрать и оценить эффективность различных способов выделения ДНК для растительного материала с высоким содержанием полифенольных соединений, используя, в том числе готовые коммерческие наборы, а по результатам оценки качества выделенной ДНК и ПЦР анализа при необходимости, провести модификацию метода. В результате исследований была выделена ДНК из замороженных листьев 12 сортов смородины чёрной селекции ФНЦ Садоводства различными способами выделения ДНК на основе детергента CTAB: по D. Puchooa для растительного материала с высоким содержанием полифенольных соединений с модификациями, способом выделения ДНК из косточковых культур в присутствии СТАВ с модификациями, используемым в ФНЦ Садоводства, коммерческими наборами для выделения растительной ДНК «СОРБ-ГМО-Б» (ЗАО Синтол) и «Plant DNA Isolation Kit» (FOREGENE)). Полученная ДНК исследовалась на спектрофотометре и с помощью ПЦР анализа. В результате оценки качества выделенной ДНК удалось определить наиболее эффективные и нетрудоемкие способы выделения ДНК из замороженных листьев смородины чёрной. Способ выделения ДНК, используемый в ФНЦ Садоводства, показал высокий выход ДНК и достаточную для проведения ПЦР анализа чистоту. Результаты оценки способов выделения ДНК из замороженных листьев смородины чёрной коммерческими наборами показали небольшой выход ДНК (до 30 нг/мл), сравнительно высокую чистоту выделенного образца, но при этом, оказались менее трудоемкими, чем два предыдущих метода. ПЦР анализ с идентификацией SSR-маркеров позволил определить наиболее эффективный способ выделения ДНК из замороженных листьев смородины черной – способ, используемый в ФНЦ Садоводства, который является рентабельным в использовании, благодаря экономии реактивов, а за счёт большого выхода ДНК позволяет проводить оценку генетического разнообразия для большего количества локусов.