Публикации автора

С целью оценки иммунного статуса у крупного рогатого скота, инфицированного вирусом лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС), а также изучения корректирующей эффективности иммуномодулятора был проведён эксперимент на 10 животных. Крупный рогатый скот контрольной группы (n=5) был клинически здоров и отрицательно реагировал в реакции иммунодиффузии (РИД) с гликопротеидным антигеном ВЛКРС, опытной группы (n=5) - имел акушерско-гинекологическую патологию и положительную РИД. Коровам опытной группы была подкожно трёхкратно с интервалом 7 суток введена бетулиновая кислота в дозе 10 мг/кг. Отбор проб крови для оценки иммунного статуса производили до введения и на 21-е сутки после первичной инокуляции препарата. Иммунологические параметры обеих групп были подвергнуты математической обработке с помощью вариационной статистики с последующим определением нормированного отклонения (t), рассчитываемого как отношение разниц средних опытной и контрольной группы к стандартному отклонению. В тех случаях, когда исследуемый иммунологический показатель выходил за пределы интервала от -1,0 до +1,0 от среднего уровня, отмечали отклонение от нормы. Установлено, что у животных, инфицированных ВЛКРС, иммунный статус характеризовался выраженной пролиферацией лимфоидных клеток, особенно цитотоксических Т-лимфоцитов (t = 4,73) и В-лимфоцитов (t = 3,20), усилением спонтанной и индуцированной тетразолиевой активности нейтрофилов (соответственно: t = 3,92, t = 1,61) и снижением коэффициента стимуляции (t = -2,72). После применения иммуномодулятора наблюдали восстановление количества лейкоцитов, Т- и В-лимфоцитов до уровня клинически здоровых животных, снижение антигенной нагрузки, проявляющейся в снижении цитотоксических Т-лимфоцитов (t = -1,02), циркулирующих иммунных комплексов (t = -2,49) и спонтанной тетразолиевой активности (t = -1,04), а также повышение способности нейтрофилов к завершённому фагоцитозу. Таким образом, метод нормированных отклонений легкодоступен и позволяет проводить оценку корректирующей эффективности иммунобиологических препаратов с использованием многих показателей иммунной системы.

Введение. Бруцеллез остается одной из наиболее распространенных инфекций в группе особо опасных зоонозов. Устойчивость к патогенным микроорганизмам рода Brucella зависит от полноценного клеточно-опосредованного иммунитета, включающего в себя активацию бактерицидных механизмов фагоцитов. Несмотря на неоднократно доказанную роль нейтрофилов в борьбе со многими бактериальными патогенами, функции этих иммунокомпетентных клеток при бруцеллезе оставались неизученными в течение продолжительного времени.

Цель исследования. Изучение функционально-метаболической активности нейтрофилов у молодняка крупного рогатого скота, сенсибилизированного неагглютиногенным штаммом бруцелл. Материалы и методы. У молодняка крупного рогатого скота, иммунизированного против бруцеллеза вакциной из неагглютиногенного штамма Brucella abortus RB-51, оценивали функционально-метаболическое состояние нейтрофилов на 7, 14, 21, 28, 35-е сут после иммунизации в тесте с нитросиним тетразолием, а также по уровню ферментной активности миелопероксидазы и содержанию неферментных катионных белков. Измерения показателей проводили фотометрическим способом в спонтанном и стимулированном вариантах постановки с последующим расчетом коэффициентов стимуляции. В качестве стимуляторов реакции применяли дезинтеграты бруцелл и корпускулярные антигены, изготовленные из вакцинных штаммов бруцелл с разной антигенной структурой.

Результаты. Было установлено, что при иммунизации молодняка крупного рогатого скота неагглютиногенным штаммом бруцелл функционально-метаболический статус нейтрофилов характеризуется усилением активности нейтрофилов в тесте с нитросиним тетразолием на 7-е и 35-е сут исследования, отсутствием выраженных изменений в показателях ферментной активности миелопероксидазы, а также снижением количества неферментных катионных белков на 7–14-е сут после вакцинации.

Заключение. Наиболее выраженное увеличение коэффициентов стимуляции отмечается при применении в качестве стимулятора реакции дезинтегратов бруцелл. При оценке кислородзависимого метаболизма нейтрофилов в тесте с нитросиним тетразолием максимальные значения коэффициентов стимуляции отмечали на 28-е сут после вакцинации, при оценке кислороднезависимого метаболизма – на 14-е сут.

Представлены результаты испытания экспериментальных образцов бруцеллезных антигенов в качестве активатора при постановке стимулированного клеточного теста с нитросиним тетразолием invitro.

В лабораторных условиях изготовлены экспериментальные образцы бруцеллезных препаратов из штаммов бруцелл с разной антигенной структурой. Экспериментальные исследования проведены на иммунизированных R-штаммом бруцелл морских свинках.

Определены активность и специфичность исследуемых образцов, а также оптимальная концентрация, обладающая достаточным активирующим потенциалом на нейтрофилы крови иммунизированных морских свинок.

На первом этапе исследований отмечено, что дезинтеграты бруцелл и корпускулярные антигены в концентрациях соответственно 50 и 100 мкг/мл обеспечивали специфичность реакции и не вызывали неспецифической активации нейтрофильных гранулоцитов в НСТ-тесте с кровью интактных животных.

В дальнейшем была изучена динамика иммунного ответа иммунизированных морских свинок в НСТ-тесте с применением экспериментальных образцов бруцеллезных антигенов в оптимальных концентрациях. Отбор биоматериала для исследований осуществляли до иммунизации и на 7-, 14-, 21-, 28-, 42-, 55-, 69, 125-е сутки после иммунизации.

Рассчитан коэффициент стимуляции как отношение индуцированного уровня клеточной активности к спонтанному. Установлено, что максимальный уровень специфической активации нейтрофилов в НСТ-тесте отмечается преимущественно на 28-е сутки, что совпадает с пиком синтеза агглютинирующих и комплементсвязывающих антител в серологических реакциях.

Полученные в результате эксперимента данные позволяют сделать вывод о возможности применения экспериментальных образцов бруцеллезных антигенов в качестве стимулятора при постановке НСТ-теста с целью проведения достоверного контроля клеточной перестройки организма в период формирования иммунного ответа.