Исследования, направленные на поиск перспективных для диагностики туляремии антигенных комплексов, совершенствование на их основе имеющихся и конструирование новых диагностических препаратов, не утрачивают своей актуальности. При этом большие надежды возлагаются на поверхностные структуры бактериальных клеток (липополисахарид, белки наружной мембраны) туляремийного микроба.
Целью нашего исследования явилось экспериментальное обоснование возможности применения комплексных антигенов внешних мембран и секретируемых стресс-белков туляремийного микроба для разработки тест-системы для определения специфических антител.
Результаты и обсуждение. Использование комплексных антигенов внешних мембран туляремийного микроба в иммуноферментном анализе (ИФА) позволяет выявлять специфические антитела у вакцинированных людей до 1,5 лет и лабораторных животных до 1,5 мес. после вакцинации (срок наблюдения). При этом в сыворотке вакцинированных людей обнаруживаются специфические антитела класса G и M. Применение комплексных антигенов в иммуноблоттинге может использоваться в качестве подтверждающего теста при скрининге сывороток в ИФА. Полученные стрессбелки обладают более низкой связывающей активностью в ИФА, но позволяют выявлять специфические антитела у вакцинированных лабораторных животных в более ранние сроки.
Заключение. В проведенной работе был изучен диагностический потенциал комплексных антигенов и секретируемых стресс-белков Francisella tularensis. Показана возможность использования комплексных антигенов внешних мембран туляремийного микроба для разработки экспериментальной тест-системы для детекции противотуляремийных антител. Секретируемые стресс-белки могут быть полезны при конструировании тест-систем для ранней диагностики туляремии.
Francisella tularensis – этиологический агент туляремии, инфекционного заболевания человека, грызунов и зайцеообразных. F. tularensis включает четыре подвида (tularensis, holarctica, mediasiatica и novicida), которые различаются по своей патогенности и приуроченности к ландшафтно-географическим зонам. Несмотря на различия, штаммы F. tularensis проявляют очень ограниченное генетическое разнообразие, что затрудняло разработку полезных инструментов для изучения эпидемиологии патогена. Одним из первых инструментов дифференциации штаммов возбудителя туляремии стал метод VNTR. В дальнейшем развитие методов полногеномного секвенирования (WGS) способствовало созданию методов типирования бактерий с помощью анализа геномных SNP (single nucleotide polymorphism). В настоящее время для генотипирования микроорганизмов все чаще применяются иерархические методы дифференциации, основанные на MLVA и SNP-анализе. Целью исследования является статистический анализ корреляции результатов MLVA и SNP-типирования для выявления генетического разнообразия штаммов двух подвидов – F. tularensis subsp. holarctica и mediasiatica. Сравнительный анализ UPGMA (unweighted pair group method with arithmetic mean) дендрограмм методом танглеграмм позволил оценить согласованность кластеризации данных, полученных при разных способах генотипирования 31 штамма подвида holarctica. Коэффициент корреляции (BGI) составил 0,76, что означает сильную корреляцию разных методов кластеризации. Для 59 штаммов подвида mediasiatica BGI оказался равен 0,89 и приближен к показателю очень сильной корреляции. Корреляция согласованности кластеризации генотипов для обоих методов находится в пределах от сильной до очень сильной, что дает возможность их использования в иерархической схеме генотипирования штаммов F. tularensis двух изученных подвидов. Метод танглеграмм впервые применен для сравнительной оценки результатов генотипирования выборки штаммов возбудителя туляремии двух подвидов (holarctica и mediasiatica) методами MLVA и SNP-типирования.