Архив статей журнала
Возбудитель бурой бактериальной гнили влагалища листа злаковых культур Pseudomonas fuscovaginae представляет угрозу производству риса, пшеницы, кукурузы, сорго и других злаковых культур. В целях предотвращения распространения опасной бактерии с семенным материалом и своевременного обнаружения и идентификации возбудителя в посевах ценных сельскохозяйственных злаковых культур, необходимо применение современных методов диагностики. Одним из таких методов является полимеразная цепная реакция (ПЦР) уникальных для фитопатогена участков генома с последующей детекцией продуктов этой реакции. Нами проведена апробация описанных в литературе для идентификации P. fuscovaginae тестов ПЦР Pfs207-F/Pfs207-R, PfF3/PfR3 и F3/B3 с последующей детекцией продуктов путем гель-электрофореза. Тест F3/B3 проведен также в режиме «реального времени» с интеркалирующим красителем SYBR Green I. Указанные тесты позволяют обнаруживать ДНК P. fuscovaginae с аналитической чувствительностью 105 КОЕ/мл, 102 КОЕ/мл и 103 КОЕ/мл соответственно. На основе тестов Pfs207-F/Pfs207-R и PfF3/PfR3 проведена разработка новых тестов ПЦР-РВ: Pfs207-Fnew2/Pfs207-R/ Pfs207-P3 и PfF3NEW/PfR3/PfP3, аналитическая чувствительность которых составила 102 КОЕ/мл и 104 КОЕ/мл соответственно. Для всех тестов, исследованных в работе, отсутствовали положительные реакции с ДНК некоторых штаммов бактерий рода Pseudomonas, не принадлежащих виду P. fuscovaginae. Тесты Pfs207-F/Pfs207-R, PfF3/PfR3, F3/B3 (в том числе с использованием SYBR Green I) и новый тест ПЦР-РВ PfF3NEW/PfR3/PfP3 могут быть использованы для идентификации P. fuscovaginae. Разработанный в исследовании тест ПЦР-РВ Pfs207-Fnew2/Pfs207-R/Pfs207-P3 может быть использован для идентификации P. fuscovaginae в растительных образцах. В результате исследования, собрана информация о существующих тестах ПЦР для идентификации P. fuscovaginae и их применении с использованием реактивов российского производства, а также разработаны новые тесты ПЦР-РВ. Предпосевное ПЦР-тестирование семян и ранняя диагностика бактериоза в посевах злаковых культур позволит своевременно принять меры по ограничению распространения P. fuscovaginae.