Статья: Разработка тест-системы для выявления РНК вируса гриппа птиц подтипов H5 и H7 методом мультиплексной ОТ-ПЦР в режиме реального времени с использованием внутреннего контрольного образца (2025)

Читать онлайн

Введение. Высокопатогенный грипп птиц является особо опасной высококонтагиозной вирусной инфекцией домашних и диких птиц, в последние годы получившей широкое распространение на территории стран Европы, Азии, Африки и Америки. Возбудитель заболевания – вирус гриппа типа А подтипов H5 и H7. Одним из наиболее быстрых и эффективных способов идентификации и типирования вируса гриппа птиц является ОТ-ПЦР в режиме реального времени, в связи с чем представляется актуальной разработка тест-системы на основе данного метода с использованием внутреннего контрольного образца для возможности контроля основных этапов проведения реакции. При этом постановка реакции в мультиплексном формате позволяет одновременно идентифицировать несколько целевых мишеней, что уменьшает расход реагентов и время постановки реакции.

Цель исследования. Разработка тест-системы для выявления в пробах биологического материала РНК вируса гриппа птиц подтипов H5 и H7 методом мультиплексной ОТ-ПЦР в режиме реального времени и определение ее основных характеристик. Материалы и методы. Использовали изоляты вируса гриппа птиц подтипов H5, H7, H3, H4, H10, H16, вирусы ньюкаслской болезни, инфекционной бурсальной болезни, инфекционного бронхита кур, болезни Марека и аденовирус птиц. В качестве внутреннего контрольного образца служил бактериофаг MS2.

Результаты. Подобраны оптимальные сочетания систем праймеров и зондов, определены характеристики тест-системы: специфичность в отношении гомологичных и гетерологичных вирусов болезней птиц, аналитическая чувствительность, эффективность реакции амплификации, повторяемость и воспроизводимость.

Заключение. При определении валидационных характеристик разработанной тест-системы установлена ее специфичность в отношении только вируса гриппа птиц подтипов H5 и H7, аналитическая чувствительность для каждого подтипа составила 1,5 lg ЭИД50/см3, эффективность амплификации – 92 и 97% соответственно. Проведена апробация тест-системы при исследовании поступающих в лабораторию проб биологического материала, результаты соответствовали таковым для стандартных диагностических методов, используемых в референтной лаборатории вирусных болезней птиц ФГБУ «ВНИИЗЖ».

Ключевые фразы: высокопатогенный грипп птиц, вирус гриппа птиц подтипа h5, вирус гриппа птиц подтипа h7, от-пцр-рв, тест-система
Автор (ы): Грехнева Алена Дмитриевна, Зиняков Николай Геннадьевич, Андриясов Артем Валерьевич, Козлов Антон Александрович, Овчинникова Евгения Валерьевна, Андрейчук Дмитрий Борисович, Жестков Павел Дмитриевич, Чвала Илья Александрович
Журнал: ВЕТЕРИНАРИЯ СЕГОДНЯ

Предпросмотр статьи

Идентификаторы и классификаторы

SCI
Биология
УДК
578.832.1. Вирусы гриппа
598.2. Aves. Птицы в целом. Орнитология
616-076. Микроскопические и микрохимические методы. Биопсия
619. Сравнительная патология. Ветеринария
Для цитирования:
ГРЕХНЕВА А. Д., ЗИНЯКОВ Н. Г., АНДРИЯСОВ А. В., КОЗЛОВ А. А., ОВЧИННИКОВА Е. В., АНДРЕЙЧУК Д. Б., ЖЕСТКОВ П. Д., ЧВАЛА И. А. РАЗРАБОТКА ТЕСТ-СИСТЕМЫ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ РНК ВИРУСА ГРИППА ПТИЦ ПОДТИПОВ H5 И H7 МЕТОДОМ МУЛЬТИПЛЕКСНОЙ ОТ-ПЦР В РЕЖИМЕ РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ВНУТРЕННЕГО КОНТРОЛЬНОГО ОБРАЗЦА // ВЕТЕРИНАРИЯ СЕГОДНЯ. 2025. № 1, ТОМ 14
Текстовый фрагмент статьи