Статья: Разработка тест-системы для выявления РНК вируса гриппа птиц подтипов H5 и H7 методом мультиплексной ОТ-ПЦР в режиме реального времени с использованием внутреннего контрольного образца (2025)

Читать онлайн

Введение. Высокопатогенный грипп птиц является особо опасной высококонтагиозной вирусной инфекцией домашних и диких птиц, в последние годы получившей широкое распространение на территории стран Европы, Азии, Африки и Америки. Возбудитель заболевания – вирус гриппа типа А подтипов H5 и H7. Одним из наиболее быстрых и эффективных способов идентификации и типирования вируса гриппа птиц является ОТ-ПЦР в режиме реального времени, в связи с чем представляется актуальной разработка тест-системы на основе данного метода с использованием внутреннего контрольного образца для возможности контроля основных этапов проведения реакции. При этом постановка реакции в мультиплексном формате позволяет одновременно идентифицировать несколько целевых мишеней, что уменьшает расход реагентов и время постановки реакции.

Цель исследования. Разработка тест-системы для выявления в пробах биологического материала РНК вируса гриппа птиц подтипов H5 и H7 методом мультиплексной ОТ-ПЦР в режиме реального времени и определение ее основных характеристик. Материалы и методы. Использовали изоляты вируса гриппа птиц подтипов H5, H7, H3, H4, H10, H16, вирусы ньюкаслской болезни, инфекционной бурсальной болезни, инфекционного бронхита кур, болезни Марека и аденовирус птиц. В качестве внутреннего контрольного образца служил бактериофаг MS2.

Результаты. Подобраны оптимальные сочетания систем праймеров и зондов, определены характеристики тест-системы: специфичность в отношении гомологичных и гетерологичных вирусов болезней птиц, аналитическая чувствительность, эффективность реакции амплификации, повторяемость и воспроизводимость.

Заключение. При определении валидационных характеристик разработанной тест-системы установлена ее специфичность в отношении только вируса гриппа птиц подтипов H5 и H7, аналитическая чувствительность для каждого подтипа составила 1,5 lg ЭИД50/см3, эффективность амплификации – 92 и 97% соответственно. Проведена апробация тест-системы при исследовании поступающих в лабораторию проб биологического материала, результаты соответствовали таковым для стандартных диагностических методов, используемых в референтной лаборатории вирусных болезней птиц ФГБУ «ВНИИЗЖ».

Ключевые фразы: высокопатогенный грипп птиц, вирус гриппа птиц подтипа h5, вирус гриппа птиц подтипа h7, от-пцр-рв, тест-система
Автор (ы): Грехнева Алена Дмитриевна (Grehneva A. D.), Зиняков Николай Геннадьевич (Zinyakov N. G.), Андриясов Артем Валерьевич (Andriyasov A. V.), Козлов Антон Александрович (Kozlov A. A.), Овчинникова Евгения Валерьевна (Ovchinnikova E. V.), Андрейчук Дмитрий Борисович (Andreychuk D. B.), Жестков Павел Дмитриевич (ZHestkov P. D.), Чвала Илья Александрович (CHvala I. A.)
Журнал: ВЕТЕРИНАРИЯ СЕГОДНЯ

Предпросмотр статьи

Идентификаторы и классификаторы

SCI
Биология
УДК
578.832.1. Вирусы гриппа
598.2. Aves. Птицы в целом. Орнитология
616-076. Микроскопические и микрохимические методы. Биопсия
619. Сравнительная патология. Ветеринария
Для цитирования:
ГРЕХНЕВА А. Д., ЗИНЯКОВ Н. Г., АНДРИЯСОВ А. В., КОЗЛОВ А. А., ОВЧИННИКОВА Е. В., АНДРЕЙЧУК Д. Б., ЖЕСТКОВ П. Д., ЧВАЛА И. А. РАЗРАБОТКА ТЕСТ-СИСТЕМЫ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ РНК ВИРУСА ГРИППА ПТИЦ ПОДТИПОВ H5 И H7 МЕТОДОМ МУЛЬТИПЛЕКСНОЙ ОТ-ПЦР В РЕЖИМЕ РЕАЛЬНОГО ВРЕМЕНИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ВНУТРЕННЕГО КОНТРОЛЬНОГО ОБРАЗЦА // ВЕТЕРИНАРИЯ СЕГОДНЯ. 2025. № 1, ТОМ 14
Текстовый фрагмент статьи